1.接种细胞至70-90%汇合度时转染
2.使用Opti-MEM培养基稀释Lipofectamine?3000试剂(2管)，充分混匀
3.使用Opti-MEM培养基稀释DNA，制备DNA预混液，然后添加P3000?试剂，充分混匀。
4.在每管已稀释的Lipofectamine?3000试剂中加入稀释的DNA(1:1比例)。 5.室温孵育5分钟。
6.加入DNA-脂质体复合物至细胞中。 7.37℃孵育细胞2-4天。然后分析转染细胞。 siRNA转染
转染siRNA至细胞中时，遵循如上所述的DNA实验方案，但在稀释siRNA时不要 加入P3000?试剂(第3步)。
96-well 24-well 6-well 细胞培养容器 贴壁细胞 1–4×104 0.5–2×105 0.25–1×106 Opti-MEM培养基Opti-MEM培养5μL×2 稀释基 25μL×2 125μL×2 Lipofectamine?3000Lipofectamine?300.15试剂（2管） 00 0.3μL 和0.751.5μL 50μL 和3.757.5μL 250μL 和Opti-MEM培养基Opti-MEM培养10μL 稀释DNA，制备基 DNA预混液，然后DNA(0.5–5μg/μL0.2μg 添加P3000?试剂，) 1μg 5μg 充分混匀 P3000?试剂0.4μL 2μL 10μL (2μL/μgDNA) Lipofectamine?3000稀释的DNA 试剂中加入稀释的稀DNA(1:1比例) 释5μL 的5μL 25μL 25μL 125μL 125μL Lipofectamine?3000 室温孵育5分钟 加入DNA-脂质体 复合物至细胞中 96-well 24-well 6-well DNA-脂质体复10μL 合物 50μL 250μL 37°C孵育细胞2–4天。然后分析转染细胞。 表1：使用lipofectamine?3000转染DNA产品参考用量
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