基因稳定细胞株的筛选
外源基因在细胞中的表达可分为两大类，一类是瞬时表达，一类是稳定表达（又叫永久表达）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，虽然可以达到高水平的表达，但通常只持续几天。后者外源DNA整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可长期表达目的基因。建立稳定细胞株，一般是根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物对靶细胞进行筛选。最常用的抗性标记基因有潮霉素（hygromycin）、新霉素（neomycin）和嘌呤霉素（puromycin）。
实验方法：
G418（Geneticin,遗传霉素）是一种氨基糖苷类抗生素 ,在分子遗传试验中，是稳定转染最常用的抗性筛选试剂。以G418为例：转染目的基因+neo基因。G418对细胞最小致死量测定：将细胞传至25mL培养瓶中每瓶加3mL细胞生长液待细胞长满，按下列浓度加G418：0、100、200、300、400、500、600、700μg/mL，继续培养观察细胞生长及死亡情况，每天换液一次仍以上述浓度加G418，两周内使细胞全部死亡的最小浓度即为最小致死量。抗性细胞的筛选：将转染的细胞进行传代同时换为选择性培养基(生长培养液＋最小致死量浓度G418)继续培养约2周，待对照细胞全部死亡时，已基本得到G418抗性细胞的稳定克隆。挑取单个细胞的克隆至24孔塑料培养板继续进行筛选扩增即为G418抗性细胞。
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