Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎａ Ｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｄｒｕｇ Ｖｏｉ．１３ Ｎｏ．４ ・论著・Ｉ ５ 反应的情况更少。研究证明，在阿奇霉素与皮质激素的作用之 霉素进行联合治疗之后，患儿的临床症状得到了有效控制，但其 下，患者肺部功能的各项指标都得到了改善，同时患者痰液中 气道炎症仍然存在，依然会出现气管功能的异常和气道高反应 的中性粒细胞、嗜酸性粒细胞含量得到了明显的降低。因此， 性的情况。因此，患儿在临床治疗的时间是不确定的，需要长时 气道反应就得到了缓解，患者哮喘的病症得到了减轻与改善。 由研究结果可知，对照组患儿痰液中中性粒细胞和淋巴细 间的临床治疗。 阿奇霉素与皮质激素联合使用，可以很好的治疗患儿的哮 胞百分含量比试验组各高出０．２５０％，差异 ＜０．０５），有统计 喘。作为药物自身来讲，阿奇霉素比皮质激素等药物的价格便 学意义，但两组患儿痰液中嗜酸粒细胞的百分含量则没有明显 宜，并且效果显著，患儿对其依从性强，患儿的家长会更愿意接 差异。针对试验组患儿出现肠胃不适的情况，医生适当的做出 受。在治疗的过程中，为了进一步维持药物所带来的良好效果， 了调整，改变用药时间，最后使患儿不适的状况也得到了减轻。 可以降低阿奇霉素的剂量。根据王焱等人的研究可知 ，阿奇 此次研究中，试验组在患儿吸入丙酸氟替卡松的基础上，嘱患儿 霉素的确有改善气道炎症的作用，但阿奇霉素减轻气道炎症的 口服小剂量的阿奇霉素，可以使患者痰液之中的中性粒细胞、嗜 作用机制并不是十分清楚，也有待于医学界更多临床试验结果 酸性粒细胞、淋巴细胞的含量降低，患儿气道反应得到了很好的 证实以及临床资料的分析。 参考文献 改变，患儿病情得到稳定与控制。 ［１］张建君，王萍，姜新华，等．阿奇霉素辅助治疗儿童哮喘疗效观 多数研究表明，利用糖皮质激素联合阿奇霉素不仅能够有 １２４—１２６． 效治疗患者的气道炎症，而且有效提高了患者自身机体的免疫 察（７８例报告）．海峡药学，２０１３，２５（８）：［２］于艳艳，刘继贤，朱宏．阿奇霉素对毛细支气管炎后呼吸道炎性 调节功能。二者联合应用能够有效抑制患者的支气管上皮嗜酸 ２０１０，２５（４）：２９３—２９５． 性粒细胞、中性粒细胞的释放，进而减少了黏液的分泌，避免了 反应的作用．实用儿科临床杂志，［３］朱柠，何剑，陈小东．阿奇霉素对哮喘患者诱导痰中细胞因子的 气管黏膜的水肿，最终通过细胞的凋亡机制，促进炎症细胞的死 ３８（１）：２１—２５． 亡。由上述结果可知，较之单纯糖皮质激素的治疗，在加用阿奇 影响．当代护士，２０１１，霉素之后，患儿的肺功能指标以及痰液中中性粒细胞、嗜酸粒细 『４］王焱．小剂量阿奇霉素治疗呼吸道合胞病毒毛细支气管炎疗效 ４３—４５． 胞的含量也得到了明显的改善。但是，研究表明，尽管利用阿奇 观察．包头医学院学报，２０１２，２８（１）：王启龙 （邳州市人民医院检验科，江苏邳州２２１３００） 【摘要】目的对乙肝患者血清ＨＢＶ—ＤＮＡ与前ｓｌ抗原检测的方法进行探讨，了解检测ＨＢＶ—ＤＮＡ及前ｓ１抗原在诊断乙肝中的作用。方法选 取８５例乙型肝炎患者，抽取患者的肘静脉血清，采用荧光定量聚合酶链反应（ＦＱ—ＰＣＲ）进行ＨＢＶ—ＤＮＡ检测，使用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）对患 者的乙肝“两对半”、前ｓ１抗原进行检测，并对两种方法的检测结果进行统计学分析。结果乙肝患者经过检测后，在不同乙肝“两对半”的模式下， 乙肝患者的ＨＢＶ—ＤＮＡ以及前ｓ１抗原的阳性率与ＨＢＶ—ＤＮＡ的阳性率差异并无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论在对乙肝患者进行检测时，两种方 法检测的结果具有一致性、有效性，必要时采用两种方法进行联合检测，能够为乙肝患者的临床疗效考核与预后治疗提供必要的实验室数据。 【关键词】乙肝；前ｓ１抗原；ＨＢＶ—ＤＮＡ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＨＢＶ－ＤＮＡ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂａｎｄ Ｐｒｅ－Ｓ１ ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎ ８５ ｃａｓｅｓ ＷＡＮＧ Ｑｉ—ｌｏｎｇ． ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｅｏｐｌｅ＂ｓＨｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＰｉｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ ２２１３００，Ｃｈｉｎａ． 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ＨＢＶ—ＤＮＡ ａｎｄ Ｐｒｅ—Ｓ１ ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｐｒｏｂｉｎｇ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｔｈｅ ＨＢＶ—ＤＮＡ ａｎｄ Ｐｒｅ—Ｓ１ ａｎｔｉｇｅｎ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｐａｔｉｅｎｔｓ’ｓｅｒｕｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｓｅｌｅｃｔｅｄ ８５ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｐａｔｉｅｎｔｓ，ｅｘｔｒａｃｔ ｃｕｂｉｔａｌ ｖｅｉｎ ｓｅｒｕｍ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ，ｔｈｅｎ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ＨＢＶ—ＤＮＡ ｗｉｔｈ ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＦＱ－ＰＣＲ），ｗｈｉｌｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ“ｔｗｏ ｐａｉｒｓ ｏｆ ｓｅｍｉ— ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ”ａｎｄ Ｐｒｅ—Ｓ１ ａｎｔｉｇｅｎ ｗｉｔｈ ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ），ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｗｏ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ａｎａｌｙｚｅｄ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｆｔｅｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ＨＢＶ—ＤＮＡ ａｌｏｎｇ ｗｉｔｈ Ｐｒｅ－Ｓ１ ａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ＨＢＶ—ＤＮＡ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗａｓ ｎｏｔ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｉｃａｎｔ（Ｐ＞０．ｆ０５）ｉｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｍｏｄｅｓ ｏｆ“ｔｗｏ ｐａｉｒｓ ｏｆ ｓｅｍｉ—ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ”．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｉｎ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｐａｔｉｅｎｔｓ．ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｗｏ ｍｅｔｈｏｄｓ ａｒｅ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ．Ｔｗｏ ｍｅｔｈｏｄｓ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｔｏ ｍａｋｅ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗｈｅｎ ｎｅｃｅｓｓａｒｙ，ｔｈｕｓ ｐｒｏｖｉｄｉｎｇ ｎｅｃｅｓｓａｒｙ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｄａｔａ ｆｏｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｐａｔｉｅｎｔｓ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ；Ｐｒｅ—Ｓ１ ａｎｔｉｇｅｎ；ＨＢＶ—ＤＮＡ 我国是乙肝病毒感染的高流行国家，在正常人群中，表面抗 肝炎患者的肘静脉血清进行检测，详细报告结果如下。 原的阳性检出率就已经达到了９．０９％。在乙肝病毒（ＨＢＶ）基 １资料与方法 因组中有四个开放读码框，在其中一个开放读码框中有ｓ基因 和前ｓ基因。其中前Ｓ基因分为前ｓ１区与前ｓ２区。前ｓ１蛋 １．１一般资料 选取本院在２０１３年５月～２０１４年５月间收治的８５例乙 白主要是存在乙肝病毒颗粒和管型颗粒的表面，与ＨＢＶ的联系 型肝炎患者，其中男４９例，女３９例，年龄１０～６０岁，平均为 １±１５．１）岁。所有患者经过诊断都符合全国病毒性肝炎学 与复制的关系非常紧密，因此在临床上经常用ＰＣＲ与ＥＬＩＳＡ对 （３５．乙肝患者进行检测，了解患者病情。为了解两种方法检测结果 术会议所制定的诊断标准，排除其他类型的肝炎疾病或是慢性 的相关性，本研究选取本院在２０１３年５月～２０１４年５月间收 疾病。治的８５例乙型肝炎患者，采用ＦＱ—ＰＣＲ与ＥＬＩＳＡ对８５例乙型 １．２方法 ６ Ｉ中国处方约第 卷第４期 表１：不同乙肝“两对半”模式前Ｓ１抗原与ＨＢＶ—ＤＮＡ阳性率对比 ・论著・ 对患者的乙肝“两对半”、前Ｓ 抗原进行检测。 ３．１乙肝“两对半” 在本次临床研究中，对乙肝患者血清的前ｓ１抗原、乙肝 “两对半”采用的是ＥＬＩＳＡ的方法进行检测。乙肝“两对半”是 指患者的乙型肝炎病毒ＨＢｓＡｇ（表面抗原）、ＨｂｅＡｇ（ｅ抗原）、 ＨＢｃＡｂ（核心抗体）、ＨＢｅＡｂ（Ｅ抗体）、ＨＢｓＡｂ（表面抗体）等 ＨＢＶ标志物中。ｓ前区ｓ１蛋白的氨基酸（ＡＡ）２１—４７片段是 最容易受到介导、感染与影响的部分，只要受到变异病毒与该 区接触，就会具有传染性 ］。在人体中，最早出现在血清中的 患者空腹，抽取肘静脉血５ ｍＬ。常温的室内放置２ ｈ后才 抗原，也是前Ｓ区的前ｓ抗原，当检测出其产生阳性，就表示患 去离心运动口】。将血液中的血清吸出后，放在低温（一８０￣Ｃ）的 １．２．１血液收集 条件下进行保存。 １．２．２检测方法 对８５例患者采用荧光定量聚合酶链反应（ＦＱ—ＰＣＲ）进行 ＨＢＶ—ＤＮＡ检测，使用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）对患者的乙肝 “两对半”、前ｓ１抗原进行检测。 酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）：对患者的乙肝“两对半”、前ｓ１ 抗原采用ＥＬＩＳＡ进行检测，选择英科新创（厦门）科技有限公司 生产的试剂盒，ＥＬＩＳＡ仪器选择美国ＢＩＯ—ＲＡＤ生产的ｉｍａｒｋ型 酶标仪进行检测。 荧光定量聚合酶链反应（ＦＱ—ＰＣＲ）：对患者ＨＢＶ—ＤＮＡ含 量采用ＦＱ—ＰＣＲ进行检测。选择厦门安普利生物工程公司生产 的试剂盒，仪器选择美国ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ Ｍｘ３０ＯＯＰ实行荧光定 量ＰＣＲ仪进行扩增检测。 在进行检测实验时，所有的流程都必须严格按照操作说明 书进行，且室内的各项指标均在标准范围内。 １．３观察指标 对患者进行乙肝“两对半”以及前Ｓ１抗原检测，“两对半” 项目分别为ＨＢｓＡｇ（表面抗原）、ＨｂｅＡｇ（ｅ抗原）、ＨＢｃＡｂ（核 心抗体）、ＨＢｅＡｂ（ｅ抗体）、ＨＢｓＡｂ（表面抗体）［２］。 ＨＢｓＡｇ、ＨｂｅＡｇ采用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法进行检测，ＨＢｓＡｇ、 ＨｂｅＡｇ的Ｓ／ＣＯ≥１．０时则为阳性，对ＨＢ—ｓＡｂ采用ＥＬＩＳＡ双抗原 夹心法进行检测，当Ｓ／ＣＯ≥１．０时则为阳性；对ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ 采用ＥＬＩＳＡ竞争法进行检测，当Ｓ／ＣＯ＜１．０时则为阳性 。对前 ｓ１抗原采用双抗夹心法进行检测，当Ｓ／ＣＯ≥１．０时则为阳性。 ＨＢＶ—ＤＮＡ采用荧光定量聚合酶链反应（ＦＱ—ＰＣＲ）， ＜５．０ｘ １０２ ＩＵ／ｍＬ为阴性（一），≥５．Ｏ×１０２ ＩＵ／ｍＬ为阳性（＋）。 １．４统计学分析 数据采用ＳＰＳＳ １６．０软件进行统计学分析，组问比较采用 ｘ 检验，当Ｐ＜０．０５时，差异有统计学意义。 ２结果 乙肝患者经过检测后，在不同乙肝“两对半”的模式下，乙 肝患者的ＨＢＶ—ＤＮＡ以及前Ｓ１抗原的阳性率与ＨＢＶ—ＤＮＡ的 阳性率差异无统计学意义（ＪＰ＞０．０５），详情见表１。 ３讨论 在感染性疾病中，乙肝在我国肝炎发病率中是有着比较高 的发病率。根据有关数据显示，在２０世纪末，年乙肝感染率为 ７％＿４ 。乙肝病毒主要是由ＤＮＡ聚合酶、环状双股ＤＮＡ、核心 抗原以及ｅ抗原共同组合而成的，而在血清中的ＨＢＶ—ＤＮＡ是 检测患者是否患有乙肝传染性的一项最为有效的指标。因此 对ＨＢＶ患者病毒血清中的抗原、抗体进行检测，是能够达到预 防该种疾病受到感染的主要手段。因此在本次检测中，是抽取 患者的肘静脉血清，对８５例患者采用荧光定量聚合酶链反应 （ＦＱ－ＰＣＲ）进行ＨＢＶ—ＤＮＡ检测，使用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ） 者的ＨＢＶ已经受到了感染并且成功复制。通过表１可以了解 到，８５例患者经过检测，不同乙肝“两对半”模式的前ｓ１抗原 与ＨＢＶ—ＤＮＡ阳性率阳性率并无显著差异性，ＨＢｓＡｇ＋ＨｂｅＡｇ ＋ＨＢｃＡｂ（大三阳）是２６，７８．７％、３０／９０．９％，ＨＢｓＡｇ＋ＨＢｅＡｂ ＋ＨＢｃＡｂ（小三阳）是２１／７０％、２２／７３．３％，ＨＢｓＡｇ＋ＨｂｅＡｇ是 ２／５０％、３／７５％，ＨＢｓＡｇ＋ＨＢｃＡｂ是２／４０％、３／６０％，两种诊断项 目之间的阳性率并无显著差异性，证明通过两种方法能够有效 且准确的检测出前ｓ１抗原与ＨＢＶ—ＤＮＡ的阳性率，二者均可真 实的反映出ＨＢＶ的复制情况。 ３。２荧光定量ＰＣＲ 在本次临床检测中，针对乙肝患者血清中的ＨＢＶ—ＤＮＡ是 采用荧光定量ＰＣＲ进行检测。乙肝病毒中包含了ＤＮＡ聚合酶、 环状双股ＤＮＡ，因此对患者的ＨＢＶ—ＤＮＡ进行检测，能够反映 出患者ＨＢＶ的感染与复制情况，其可作为判断与治疗乙肝患者 的最为直接的数据依据 ］。荧光定量ＰＣＲ对患者的ＨＢＶ—ＰＣＲ 进行检测，其主要的优点是特异性以及敏感性都比较高，与对 患者两对半与前ｓ１抗原进行检测的ＥＬＩＳＡ相比，其准确性都 较高。从表１可以了解到，虽然二者并无显著差异性，但ＨＢＶ— ＤＮＡ诊断出的阳性率要更高。但是该种检测方法的成本与技 术难度都比较高，在我国的一些大中型医院是常见的一种检测 方式。而我国是乙肝的高发区，医疗条件有所限制，因此，在必 要的条件下，可采用ＥＬＩＳＡ进行检测，ＥＬＩＳＡ在操作简单，时间 与成本都较低，敏感性与特异性与ＰＣＲ相比并无显著地差异性， 在基层医院极大程度的填补了检测空白。但如有条件，可结合 两种方法进行共同检测，可极大程度提高准确性，降低误诊率。 综上所述，为了能够提高治疗乙肝患者的有效性，对乙肝患 者进行ＨＢＶ—ＤＮＡ、前ｓ１抗原与乙肝两对半的检测，能够在最 大程度上给予治疗提高必要的数据资料。 参考文献 ［１］张琳．乙肝患者联合检测血清前ｓＩ、ｓ２抗原的临床意义．中国 实验诊断学，２０１０，１４（５）：７１６—７１７． 『２］陈永刚，肇玉博，杨文涛．ＨＢＶ血清标志物联合Ｐｍ＝Ｓｌ抗原或ＨＢＶ ＤＮＡ检测的临床价值．现代中西医结合杂志，２０１４，２３（１０）：１１１６－１１１７． ［３］Ｇｏｕｓ Ｎ，Ｂｈｉｍｍａ Ｒ，Ｋｅｗ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｓ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｌｆａｍｅ ｏｆ ＨＢＶ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｒｆｏｍ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗｉｔｈ ｍｅｍｂｒａｎｏｕｓ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ ｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ—ａｌ—ｐｈａ２ｂ．ＡｎｔｉｖｉｒＴｈｅｒ，２０１０，１５（１）：６１－６９． ［４］ＨｕａｎｇＸ，ＱｉｎＹ，ＺｈａｎｇＰ，ｅｔ ａ１．ＰｒｅＳｄｅｌｅｔｉｏｎｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｏｆｈｅｐａｔｉｔｉｓＢ ｖｉｒｕｓ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃａｌｌｙ ｉｎｆｅｃｔｄｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｉｗｔｈ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｓｅｍｐｏｓｉｔｉｖｉｔｙ ｆｏｒ ｈｅｐａｔｉｉｔｓ Ｂ ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ｎａｔｉ－ＨＢＳ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｊ Ｍｅｄ Ｖｉｒｏｌ，２０１０，８２（１）：２３—３１． ［５］林国跃，张和平，罗婷，等．ＨＢＶ前ｓ１蛋白与ＨＢＶ—ＤＮＡ检测和 乙肝二对半模式相关性研究．中国实验诊断学，２０１１，１５（２）：３４１—３４２． ［６】彭宁，凌杰．乙型肝炎孕妇血清中ＨＢＶ—ＤＮＡ、乙型肝炎前ｓ１ 抗原、甲胎蛋白检测分析．检验医学与临床，２０１２，（２０）：２６０６—２６０８．