两水相系统中蛋白质分配系数测定实验报告

两水相系统中蛋白质分配系数的测定 一、实验目的和要求

介绍蛋白质在两水二者系统中分配系数的测定方法 二、实验原理 1、两水相的构成

高聚物与无机盐在水中会形成两个相，如PEG与硫酸盐或碱性磷酸盐，这是由于盐析作用。两种亲水性高聚物在水中会形成两个相，这是由于聚合物的不相容性。但是只有达到一定的浓度时，才能形成两相；两水相形成的定量关系可用相图来表示；相图是研究双水相萃取的基础。

2、两水二者系统的优点

（1）生物大分子活性物质（蛋白）不易受到破坏； （2）两看中水分占到非常大比例；

（3）两水相的相间张力小,相分离过程温和。

（4）两水二者之间的传质过程和均衡过程快速，可以同时实现快速拆分； （5）易于放大

3、在两水二者系统中，生物物质与成相组分之间通过疏水键、氢键和离子键等相互作用而相同程度地分配在两看中。

（1）分配系数：当萃取达到平衡时，蛋白质在上、下两相中的浓度之比称为分配系数，分配系数K = C上/ C下;

（2）较之：上下二者体积比称作较之R = V上/ V之下 三、实验器材与试剂 1. 器材

天平，台式离心机，10 mL刻度离心管，移液管，容量瓶，试管等。 2. 试剂

糖化酶，聚乙二醇400，硫酸铵和考马斯亮蓝等。

四、操作方法

1、蛋白质在两相中的分配

在10 mL刻度离心管中，用电子天平称取硫酸铵液态1.30 g，聚乙二醇400液体2.00 g，用液体重新加入已吸收的糖化酶液2.00 mL，然后搅拌，直至总量为8.00g，用橡皮塞塞紧试管口，用力振摇数分钟，并使硫酸铵全然熔化，并使两二者充份混合，以便酶在两看中的分配达至均衡，然后，用台式离心机Vergt3 min，输出功率调节至3000 r/min，分别念出上、下相的体积，谋较之R，